Stress-Induced Premature Senescence Promotes Proliferation by Activating the SENEX and p16INK4a/Retinoblastoma (Rb) Pathway in Diffuse Large B-Cell LymphomaJiyu Wang, Zhitao Wang, Huiping Wang, Zhixiang Wanyan, Ying Pan, Fengfeng Zhu, Qianshan Tao, Zhimin ZhaiThe Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Department of Hematology, Hefei, Anhui, P.R. China
Objective: Cellular senescence has been thought to be an important barrier to tumor formation. Recent studies have shown that stressinduced premature senescence (SIPS) can promote partial tumor invasion, but how SIPS affects diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) remains inconclusive. This study aimed to address that issue.
Materials and Methods: The immunophenotype of the LY8 cell line was measured with flow cytometry. SIPS induced by tert-butyl hydroperoxide (tBHP) was detected by senescence β-galactosidase staining. Cell proliferation was analyzed with CCK8 and expression levels of ARHGAP18 (SENEX gene-encoding protein), p16/p21, and
Rb/pRb were measured with western blot. LY8 cells were transfected with SENEX-SiRNA/NC and verified by western blot.
Results: Our results suggested that the immunophenotype of the LY8 cell line is CD19-, CD20-, and CD10-positive and the immunoglobulin light chain is the kappa type. The cellular senescence model of DLBCL could be successfully induced by 30 µM tBHP. ARHGAP18, p21, p16, and Rb protein levels were significantly increased but the level of pRb expression was decreased in the SIPS group compared with other groups. Meanwhile, the proliferation rate was increased in the SIPS group more than other tBHP groups. Furthermore, the expressions of p21 and p16 were significantly decreased in the SENEX-SiRNA group compared with the negative control group.
Conclusion: SIPS formation activates ARHGAP18 and the p16/Rb pathway and promotes DLBCL cell proliferation. Furthermore, SENEX activates the p16 pathway in DLBCL. SIPS promotes proliferation by activating SENEX and the p16/Rb pathway in DLBCL. SENEX-related SIPS may serve as an important target for relapsed/refractory DLBCL therapy.
Keywords: Stress-induced premature senescence, Proliferation, SENEX, p16, Rb/pRb, Diffuse large B-cell lymphoma
Diffüz Büyük B Hücreli Lenfomada, Stres Kaynaklı Erken Hücresel Yaşlanma (Senesens), SENEX ve p16INK4a/- Retinoblastom (Rb) Yolağını Aktive Ederek Proliferasyonu ArtırırJiyu Wang, Zhitao Wang, Huiping Wang, Zhixiang Wanyan, Ying Pan, Fengfeng Zhu, Qianshan Tao, Zhimin ZhaiThe Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Department of Hematology, Hefei, Anhui, P.R. China
Amaç: Hücresel yaşlanmanın tümör oluşumuna karşı önemli bir engel olduğu düşünülmektedir. Son çalışmalarda stresin tetiklediği erken yaşlanmanın (senesens) (SIPS) kısmi tümör invazyonunu kolaylaştırabileceği gösterilmiş olmakla birlikte SIPS’nin diffüz büyük B hücreli lenfomayı (DBBHL) nasıl etkilediği bilinmemektedir. Çalışmada bu konunun ele alınması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: LY8 hücre dizisinin immünfenotipi akış sitometri ile belirlendi. Tert-butil hidroksiperoksitin (tBHP) oluşturduğu SIPS β-galaktozidaz boyası ile tesbit edildi. Hücre proliferasyonu CCK8 ile analiz edildi ve ARGHAP18 (SENEX genini kodlayan protein), p16/p21 ve pRb ekspresyon seviyeleri western-blot ile ölçüldü. LY8 hücreleri SENEX-SiRNA/NC ile transfekte edilerek western-blot ile gösterildi.
Bulgular: Sonuçlarımıza göre LY8 hücre dizisinin immünfenotipi CD19, CD20 ve CD10 pozitiftir ve immünoglobulin hafif zinciri kappadır. DBBHL’de hücresel yaşlanma modeli 30 µM tBHP ile başarılı bir şekilde oluşturulabilir. ARHGAP18, p21,p16 ve Rb protein seviyeleri anlamlı olarak arttı fakat pRb ekspresyon seviyeleri diğer gruplarla karşılaştırıldığında SIPS grubunda azaldı. Bu arada, SIPS grubunda, diğer tBHP grubu ile karşılaştırıldığında proliferasyon hızı daha çok arttı. Ek olarak, p21 ve p16 ekspresyonları SENEX-SiRNA grubunda, negatif kontrol grubu ile karşılaştırıldığında anlamlı ölçüde azaldı.
Sonuç: SIPS oluşumu ARHGAP18 ve p16/Rb yolağını aktive eder ve DBBHL hücrelerinin proliferasyonunu artırır. Ek olarak SENEX DBBHL’da p16 yolağını aktive eder. SIPS DBBHL’de SENEX ve p16/ Rb yolağını aktive ederek proliferasyonu destekler. SENEX ilişkili SIPS relaps/refrakter DBBHL tedavisinde önemli bir hedef olabilir.
Anahtar Kelimeler: Stresin tetiklediği erken yaşlanma, Proliferasyon, SENEX, p16, Rb/pRb, Diffüz büyük B hücreli lenfoma
Jiyu Wang, Zhitao Wang, Huiping Wang, Zhixiang Wanyan, Ying Pan, Fengfeng Zhu, Qianshan Tao, Zhimin Zhai. Stress-Induced Premature Senescence Promotes Proliferation by Activating the SENEX and p16INK4a/Retinoblastoma (Rb) Pathway in Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Turk J Hematol. 2019; 36(4): 247-254
Corresponding Author: Zhimin Zhai, China |
|