Circular RNA PVT1 Regulates Cell Proliferation, Migration, and Apoptosis by Stabilizing c-Myc and Downstream Target CXCR4 Expression in Acute Myeloid LeukemiaXian Fu Sheng1, Li Li Hong1, Lei Fan2, Yu Zhang1, Kai-Li Chen1, Jie Mu1, Si Yu Shen1, Hai Feng Zhuang11The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University (Zhejiang Provincial Hospital of Chinese Medicine), Department of Hematology, Zhejiang, China
2The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Department of Pharmacy, Zhejiang, China
Objective: This study aimed to investigate the role and mechanism of circular RNA PVT1 (circPVT1) in patients with acute myeloid leukemia (AML).
Materials and Methods: The expression of circPVT1 in 23 patients with de novo AML (not acute promyelocytic leukemia, not APL) and cell lines were detected by RT-qPCR. Loss of function assays were carried out to explore the influence of silenced circPVT1 on the proliferation, migration, and apoptosis in the THP-1 cell line. CCK-8 assays, transwell assays, and annexin V/PI staining assays were performed to assess proliferation, migration, and apoptosis, respectively.
Results: CircPVT1 was highly expressed in AML patients and myeloid cell lines compared to healthy controls. Higher expression of circPVT1 was related to shorter overall survival (OS) and relapse-free survival (RFS) in AML patients. Cell viability and migration were inhibited and apoptosis was increased when circPVT1 was knocked down in THP-1 cells. Knockdown of circPVT1 resulted in marked suppression of c-Myc protein with no significant change in mRNA levels. We also found that circPVT1 knockdown markedly increased the phosphorylation of c-Myc Thr-58, which was responsible for c-Myc degradation. Silencing of c-Myc caused a significant decrease in CXCR4 mRNA and protein expression, whereas the overexpression of c-Myc caused the opposite result, suggesting that CXCR4 is a target molecule of c-Myc. Finally, we found that overexpression of c-Myc could partially reverse circPVT1 knockdown-induced anti-tumor effects on THP-1 cells in vitro.
Conclusion: Our findings showed that circPVT1 was highly expressed in AML patients and was related to shorter OS and RFS. CircPVT1 may exert an oncogenic effect in THP-1 cells by stabilizing c-Myc protein expression and downstream target CXCR4 expression. These data indicate that circPVT1 may be a promising therapeutic target for AML.
Keywords: Acute myeloid leukemia, CircPVT1, c-Myc, CXCR4
Akut Myeloid Lösemide Hedef CXCR4 İfadesinin Baskılanması ve c-MYC Stabilizasyonu ile Hücre Çoğalmasının, Göçünün ve Yok Edilmesinin Dairesel PVT1 RNA ile DüzenlenmesiXian Fu Sheng1, Li Li Hong1, Lei Fan2, Yu Zhang1, Kai-Li Chen1, Jie Mu1, Si Yu Shen1, Hai Feng Zhuang11The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University (Zhejiang Provincial Hospital of Chinese Medicine), Department of Hematology, Zhejiang, China
2The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Department of Pharmacy, Zhejiang, China
Amaç: Bu çalışma, akut myeloid lösemili (AML) hastalarda dairesel RNA PVT1’in (circPVT1) rolünü ve mekanizmasını araştırmayı amaçladı.
Gereç ve Yöntem: De novo AML’li (akut promyelositik lösemi olmayan, APL olmayan) 23 hastada circPVT1 ifadesi ve hücre dizileri RT-qPCR ile saptandı. THP-1 hücre hattında susturulmuş circPVT1’in hücre çoğalması, göçü ve ölümü üzerindeki etkisini araştırmak için fonksiyon kaybı analizleri yapıldı. Sırasıyla hücre çoğalması, göçü ve yok edilmesini değerlendirmek için CCK-8 deneyleri, trans-kuyu deneyleri ve annexin V/PI boyama deneyleri yapıldı.
Bulgular: CircPVT1, sağlıklı kontrollerle karşılaştırıldığında AML hastalarında ve miyeloid hücre hatlarında yüksek oranda ifade edildi. CircPVT1’in daha yüksek ifadesi, AML hastalarında daha kısa genel sağkalım (GS) ve hastalıksız sağkalım (HsS) ile ilişkiliydi. THP-1 hücrelerinde CircPVT1 devre dışı bırakıldığında hücre canlılığı ve göçü inhibe edildi ve ölümü arttı. CircPVT1’in yıkılması, mRNA seviyelerinde önemli bir değişiklik olmadan c-Myc protein ifadesinin belirgin bir şekilde bastırılmasına neden oldu. Ayrıca CircPVT1 yıkımının, c-Myc bozulmasından sorumlu olan c-Myc Thr-58’in fosforilasyonunu belirgin şekilde artırdığını da bulduk. c-Myc’nin susturulması, CXCR4 mRNA’sında ve protein ifadesinde önemli bir azalmaya neden olurken, c-Myc’nin aşırı ifadesi ise CXCR4’ün c-Myc’nin bir hedef molekülü olarak belirgin ifadesi ile tam zıt etkiye neden oldu. Son olarak, c-Myc’nin aşırı ifadesinin, in vitro THP-1 hücreleri üzerindeki CircPVT1 ifadesinin azaltılması ile uyarılan anti-tümör etkilerini kısmen tersine çevirebileceğini bulduk.
Sonuç: Bulgularımız, CircPVT1’in AML hastalarında yüksek oranda ifade edildiğini ve daha kısa GS ve HsS ile ilişkili olduğunu gösterdi. CircPVT1, c-Myc protein ifadesinin stabilizasyonu ve hedef CXCR4 ifadesinin baskılanması ile THP-1 hücrelerinde onkojenik etkide artış sağlayabilir. Bu veriler, CircPVT1’in AML için umut verici bir terapötik hedef olabileceğini göstermektedir.
Anahtar Kelimeler: Akut myeloid lösemi, CircPVT1, c-Myc, CXCR4
Xian Fu Sheng, Li Li Hong, Lei Fan, Yu Zhang, Kai-Li Chen, Jie Mu, Si Yu Shen, Hai Feng Zhuang. Circular RNA PVT1 Regulates Cell Proliferation, Migration, and Apoptosis by Stabilizing c-Myc and Downstream Target CXCR4 Expression in Acute Myeloid Leukemia. Turk J Hematol. 2023; 40(2): 82-91
Corresponding Author: Hai Feng Zhuang, China |
|