Cloning of chimerical translocations as positive control for molecular genetic diagnosis of leukemiaDuran Ustek1, Sema Sırma1, Aris Cakiris1, Fulya Coşan2, Başar Oku1, Uğur Özbek11Experimental Medical Research Institute, Istanbul, Turkey
2Department Of Internal Medicine, Istanbul Medical Faculty, Istanbul, Turkey
The diagnosis of leukemia-specific mRNAs by polymerase chain reaction (PCR) and reverse transcription-PCR (RT-PCR) require well-known positive standard controls. In general, the positive controls are obtained from cell lines and leukemia patients who have been diagnosed at the molecular level by RT-PCR. These are expensive and restricted sources for standard positive controls. Thus, there is a need for less expensive and reproducible standard positive controls in this area. We have cloned the t (9: 22) p190, t (9: 22) p210, t (4: 11), t (1: 19), t (15: 17), t (12; 21) breakpoint junctions of fusion genes into the plasmids. Cloned fusion genes are suitable for testing PCR experiments of the molecular genetic diagnosis of leukemia samples. We cloned and optimized fusion gene junctions as a standard positive control to check PCR efficiency and as a standard positive marker for diagnosis. Keywords: Fusion genes, cloning, reverse transcription-PCR
Lösemilerin moleküler genetik teşhisinde kullanılmak üzere arnslokasyonların pozitif standart amaçlı olarak klonlanmasıDuran Ustek1, Sema Sırma1, Aris Cakiris1, Fulya Coşan2, Başar Oku1, Uğur Özbek11Experimental Medical Research Institute, Istanbul
2Department Of Internal Medicine, Istanbul Medical Faculty, Istanbul
Lösemiye özgü kimerik mRNA’ların ters transkriptaz PCR ile saptanmasında standart Kontrollerin olması oldukça önemlidir. Lösemi hastalarından elde edilen kimerik genlere ait pozitif örnekler veya hücre hatlarından elde edilen standartlar yaygın olarak kullanılmaktadır. Gerek hasta örnekleri, gerekse hücre hatlarından elde edilen pozitif kontroller, kısıtlı, pahalı ve bir çok sorunlar oluşturmaktadır. Daha ucuz, tekrar üretilebilir standartların üretilmesi ihtiyaç haline gelmiştir. Biz p190, t (9: 22) p210, t (4: 11), t (1: 19), t (15: 17), t (12; 21) kimerik gen bölgelerini plasmidlere klonlayarak daha ucuz ve tekrar üretilebilen standart pozitif kontrolleri ürettik. Bu plasmidler, lösemilerin moleküler genetik teşhisinde standart pozitif marker olarak PCR ve RT-PCR sırasında kullanılabilir inancını taşımaktayız. Anahtar Kelimeler: Füzyon genler, klonlama, ters transkriptaz PCR
Duran Ustek, Sema Sırma, Aris Cakiris, Fulya Coşan, Başar Oku, Uğur Özbek. Cloning of chimerical translocations as positive control for molecular genetic diagnosis of leukemia. Turk J Hematol. 2008; 25(1): 20-23
Corresponding Author: Duran Ustek, Türkiye |
|