Rapid Detection of the Apoptosis Related Genes (BCL-2, BAD, BAX) in 12 Hours 1,25 (OH)2D3 Treated HL-60 Cells Using Real-Time Quantitative RT-PCRHakan Savlı1, Saadet Özdemir1, Balint Nagy21Basic Sciences Of The Faculty Of Medicine, Kocaeli University, Kocaeli, Turkey
2Genetics Laboratory, 1st Department Of Obstetrics And Gynecology, Semmelweis University, Budapest, Hungary
HL-60 cell line offers an interesting model to study apoptosis. Our aim was to detect the expressions of three apoptotic genes (BCL-2, BAD and BAX) using Real-Time quantitative polymerase chain reaction (PCR). HL-60 cells were incubated with 1,25 (OH)2D3 (5 x 10-8 M). RNA portions were isolated and LightCycler analysis were performed on cDNA samples. 1,25 (OH)2D3 incubated cell portions were compared to nontreated portions. We observed down-regulated levels of three genes at the end of the 12 hours. Gene expression ratios were 0.98 for BAX, 0.41 for BAD, 0.81 for BCL-2. For the first time, this study represents the expression levels of these three apoptosis related genes together during early phase (12 hours) of 1,25 (OH)2D3 treatment of HL-60 cells. Data indicate that expression differences of these apoptosis genes take place so early in exposure to 1,25 (OH)2D3. This optimised strategy would be used in rapid understanding of similar apoptotic deregulations. Keywords: 1, 25 (OH)2D3, Gene expression, HL-60, Apoptosis.
1,25 (OH)2D3’le Karşlaşan HL-60 Hücrelerinde Apoptozis ile İlgili Genlerin (BCL-2, BAB, BAX) RT-PCR ile Hızlı AnaliziHakan Savlı1, Saadet Özdemir1, Balint Nagy21Basic Sciences Of The Faculty Of Medicine, Kocaeli University, Kocaeli, Turkey
2Genetics Laboratory, 1st Department Of Obstetrics And Gynecology, Semmelweis University, Budapest, Hungary
HL-60 hücre hattı apoptozis çalışmak için ilginç bir model teşkil eder. Amacımız üç apoptotik gene (BCL-2, BAD and BAX) ait anlatımları gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanarak saptamaktı. HL-60 hücreleri 1,25 (OH)2D3 (5 x 10-8 M) ile inkübe edildi. RNA porsiyonları izole edildi ve cDNA örneklerinde LightCycler analizleri gerçekleştirildi. Oniki saat sonunda üç gene ait anlatım azalması gözledik. Gen anlatım oranları BAX için 0.98, BAD için 0.41, BCL-2 için 0.81 idi. Bu çalışma bu üç genin birlikte anlatım oranlarını 1,25 (OH)2D3 ile işlenmiş HL-60 hücrelerinde erken fazdaki (12 saat) ilk analizini sunmaktadır. Bilgiler bu apoptozis genlerinin 1,25 (OH)2D3 maruziyetine bağlı olarak anlatım farklılaşmasının çok erken dönemde yer aldığına işaret etmektedir. Bu optimize edilmiş strateji benzer apoptotik düzen degişikliklerinin hızlı anlaşılmasında kullanılabilir. Anahtar Kelimeler: 1, 25 (OH)2D3, Gen ekspresyonu, HL-60, Apotozis.
Hakan Savlı, Saadet Özdemir, Balint Nagy. Rapid Detection of the Apoptosis Related Genes (BCL-2, BAD, BAX) in 12 Hours 1,25 (OH)2D3 Treated HL-60 Cells Using Real-Time Quantitative RT-PCR. Turk J Hematol. 2004; 21(1): 23-26
Corresponding Author: Hakan Savlı, Türkiye |
|