LncRNA-DUXAP8 Regulation of the Wnt/β-Catenin Signaling Pathway to Inhibit Glycolysis and Induced Apoptosis in Acute Myeloid LeukemiaHong Zhai, Junting Zhao, Juan Pu, Pan Zhao, Jin WeiThe Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College, Department of Hematology, Nanchong, China
Objective: Acute myeloid leukemia (AML) is a malignancy of the hematopoietic system, accounting for approximately 70% of acute leukemias. Long noncoding RNA-DUXAP8 (lncRNA-DUXAP8) has been found to be abnormally expressed in a variety of tumors. However, its function and mechanism in AML have not been studied. We investigate the effect of lncRNA-DUXAP8 on AML and its mechanism so as to provide a new theoretical basis for the diagnosis and treatment of AML.
Materials and Methods: The expression of lncRNA-DUXAP8 in AML bone marrow tissues and the THP-1, HL-60, TF-1, AML193, and U937 cell lines was detected by qRT-PCR. It was then altered by transfecting plasmids overexpressing si-DUXAP8 and lncRNA-DUXAP8, respectively. CCK8 and cell colony assay were performed to evaluate the proliferation ability of AML cells. In addition, flow cytometry was used to observe the apoptosis process. Glucose and lactate kits were utilized to detect glucose consumption and lactate levels. Finally, western blotting was performed to detect the expression of proteins related to the Wnt/β-catenin signaling pathway in cells.
Results: LncRNA-DUXAP8 was downregulated in both AML bone marrow tissues and cell lines. Upon interfering with lncRNA-DUXAP8 in AML cell line THP-1, AML cell proliferation and glycolysis were promoted while cell apoptosis was inhibited. The opposite results were obtained after overexpressing lncRNA-DUXAP8. Meanwhile, western blotting confirmed that interference with lncRNA-DUXAP8 stimulated the expression of proteins Wnt5a, β-catenin, c-Myc, and cyclin-D1 in the Wnt/β-catenin pathway. Moreover, overexpression of lncRNA-DUXAP8 inhibited the expression of Wnt/β-catenin pathway proteins. Finally, LiCl, an activator of the Wnt/β-catenin pathway, reversed the regulation of AML cells by lncRNA-DUXAP8 upregulation compared with the DUXAP group.
Conclusion: This study showed that lncRNA-DUXAP8 regulated the Wnt/β-catenin signaling pathway to inhibit glycolysis and induce apoptosis in AML. This experiment has provided new angles and an experimental basis for treating patients with AML.
Keywords: Acute myeloid leukemia, LncRNA-DUXAP8, Apoptosis, Glycolysis, Wnt/β, -catenin signaling pathway
Akut Myeloid Lösemide Glikolizi Önlemek ve Apoptozu İndüklemek için Wnt/β-Catenin Sinyal Yolunun LncRNA-DUXAP8 ile DüzenlenmesiHong Zhai, Junting Zhao, Juan Pu, Pan Zhao, Jin WeiThe Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College, Department of Hematology, Nanchong, China
Amaç: Akut miyeloid lösemi (AML), hematopoietik sistemin bir malinitesidir ve akut lösemilerin yaklaşık %70’ini oluşturur. Uzun kodlamayan RNA-DUXAP8’in (lncRNA-DUXAP8) çeşitli tümörlerde anormal şekilde ifade edildiği bulunmuştur. Ancak, AML’deki işlevi ve mekanizması çalışılmamıştır. AML’nin tanı ve tedavisi için yeni bir teorik temel sağlamak amacıyla lncRNA-DUXAP8’in AML ve mekanizması üzerindeki etkisini araştırdık.
Gereç ve Yöntem: AML kemik iliği dokularında ve THP-1, HL-60, TF-1, AML193 ve U937 hücre dizilerinde lncRNA-DUXAP8 ifadesi qRT-PCR ile tespit edildi. Daha sonra sırasıyla si-DUXAP8 ve lncRNA-DUXAP8’i aşırı ifade eden plazmitlerin transfekte edilmesiyle değiştirildi. AML hücrelerinin çoğalma yeteneğini değerlendirmek için CCK8 ve hücre kolonisi testi yapıldı. İlaveten, apoptoz sürecini gözlemlemek için akım sitometri kullanıldı. Glukoz tüketimini ve laktat düzeylerini saptamak için glukoz ve laktat kitleri kullanıldı. Son olarak, hücrelerde Wnt/β-katenin sinyal yolu ile ilgili proteinlerin ifadesini saptamak için western blot testi yapıldı.
Bulgular: LncRNA-DUXAP8, hem AML kemik iliği dokularında hem de hücre dizilerinde baskılanmıştı. AML hücre dizisi THP-1’de lncRNA-DUXAP8’e müdahale edilmesi üzerine, hücre apoptozu inhibe edilirken AML hücre proliferasyonu ve glikoliz kolaylaştırıldı. lncRNADUXAP8’ in aşırı ifadesinden sonra tersi sonuçlar elde edildi. Bu arada, western blot yöntemi, lncRNA-DUXAP8 ile etkileşimin Wnt/β-katenin yolağında Wnt5a, β-katenin, c-Myc ve siklin-D1 proteinlerinin ifadesini stimüle ettiğini doğruladı. Ayrıca, lncRNA-DUXAP8’in aşırı ifadesi, Wnt/β-katenin yolu proteinlerinin ifadesini inhibe etti. Son olarak, Wnt/β-katenin yolunun bir aktivatörü olan LiCl, DUXAP grubuyla karşılaştırıldığında lncRNA-DUXAP8 upregülasyonu ile AML hücrelerinin regülasyonunu tersine çevirdi.
Sonuç: Bu çalışma, lncRNA-DUXAP8’in, AML’de glikolizi inhibe etmek ve apoptozu indüklemek için Wnt/β-katenin sinyal yolunu düzenlediğini gösterdi. Bu deney, AML’li hastaları tedavi etmek için yeni açılar ve deneysel bir temel sağlamıştır.
Anahtar Kelimeler: Akut myeloid lösemi, LncRNA-DUXAP8, Apoptoz, Glikoliz, Wnt/β, -katenin sinyal yolu
Hong Zhai, Junting Zhao, Juan Pu, Pan Zhao, Jin Wei. LncRNA-DUXAP8 Regulation of the Wnt/β-Catenin Signaling Pathway to Inhibit Glycolysis and Induced Apoptosis in Acute Myeloid Leukemia. Turk J Hematol. 2021; 38(4): 264-272
Corresponding Author: Jin Wei |
|